細(xì)胞活力/毒性檢測(cè)試劑盒(超高靈敏型CCK-8試劑盒)
超高靈敏型CCK-8細(xì)胞活力測(cè)定試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性相對(duì)定量及絕對(duì)定量檢測(cè)的快速、高靈敏度試劑盒,比傳統(tǒng)的MTT、XTT及CCK-8方法具有更好的檢測(cè)靈敏度和更寬的線性范圍。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的超高靈敏型CCK-8溶液,無須再進(jìn)行任何配制等操作。無須使用同位素,所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞,不必收集細(xì)胞,也不必采用額外的步驟去溶解反應(yīng)生成物,可用于大批量樣品的高通量檢測(cè)。
使用方法:
1. 使用96孔板,細(xì)胞培養(yǎng)和處理完畢。
2. 逐孔加入超高靈敏型CCK-8試劑,每孔100μl培養(yǎng)基中加入10μl超高靈敏型CCK-8試劑。
3. 培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,37℃孵育1~4小時(shí)。
4. 于490nm處測(cè)定OD值。
5. 結(jié)果分析 將各測(cè)試孔的OD值減去對(duì)照孔OD值。各平行孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞活力% =(加藥細(xì)胞OD-空白OD)/(對(duì)照細(xì)胞OD-空白OD)×100%
6. 若使用除96孔外的培養(yǎng)板,試劑用量按照培養(yǎng)基體積等比例增減。
使用注意事項(xiàng):
1. 試劑加入后需輕輕振搖培養(yǎng)板,使超高靈敏型CCK-8試劑與培養(yǎng)基充分混勻。
2. 試劑加入后培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對(duì)于貼壁細(xì)胞,加入超高靈敏型CCK-8的培養(yǎng)時(shí)間一般為1~4小時(shí),但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度(根據(jù)細(xì)胞種類而定)。與貼壁細(xì)胞相比,懸浮細(xì)胞較難顯色。對(duì)于懸浮細(xì)胞,在加入超高靈敏型CCK-8培養(yǎng)1~4小時(shí)后,可先從培養(yǎng)箱中取出,目測(cè)染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定。若顯色困難,可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。
3. 如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑,需要檢查背景的OD值,即在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物,然后加入超高靈敏型CCK-8試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè),和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較(只加超高靈敏型CCK-8試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應(yīng)。
4. 若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或pH發(fā)生變化,建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入超高靈敏型CCK-8試劑。含有酚紅的培養(yǎng)基不影響本試劑的使用。
5. 如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,建議設(shè)定600nm(或600nm以上)作為參比波長(zhǎng),扣除參比波長(zhǎng)的OD值即可。
6. 如果要測(cè)定細(xì)胞的具體數(shù)量,需要先做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7. 若測(cè)得OD值過高,可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或超高靈敏型CCK-8試劑用量。
8. 本試劑盒靈敏度高,相比傳統(tǒng)的CCK-8法及MTT、XTT法,建議起始細(xì)胞加樣數(shù)/培養(yǎng)數(shù)減半或更少,其他實(shí)驗(yàn)條件不變。如用CCK-8法時(shí)需加4000個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)后檢測(cè),用本試劑盒時(shí)僅需2000個(gè)細(xì)胞即可。
9. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),于490nm所測(cè)得OD值在0.5~1.5范圍內(nèi)為佳。
試劑包裝:
100次:1ml×1瓶; 500次:5ml×1瓶; 3,000次:5ml×6瓶; 10,000次:100ml×1瓶;
貯藏條件:
超高靈敏型CCK-8在避光0~5℃的條件下存放一年,測(cè)定效果完全不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。
本產(chǎn)品僅供科研使用,不做其它用途。