細胞增殖檢測試劑盒(MTS)
產(chǎn)品簡介:
MTS是一個基于光吸收檢測的均相非標記細胞活力測定試劑。一步操作,可用于細胞增殖和毒性分析,方法簡便而準確。該試劑可被活細胞還原為具有高度水溶性的,可在490nm處檢測的甲臜染料,甲臜的生成量與活細胞的數(shù)量和活力成正比。
試劑的優(yōu)點
1. 結(jié)果準確,重現(xiàn)性好:試劑不影響細胞活力,顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液,直接測定OD值即可準確反應細胞活力。
2. 操作省時簡單:試劑即開即用,只需一步操作,即可檢測。無需額外清洗,加DMSO等步驟,重現(xiàn)性好。
3. 安全性好:不含放射性同位素和有機溶劑,使用安全。
4. 靈敏度高:靈敏度高于MTT、XTT、CCK-8等方法。
使用方法:
*以下操作步驟針對96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)每孔100μl細胞,若使用96孔外的培養(yǎng)板,試劑用量等比例增減。
1. 取出MTS試劑于室溫或37℃溶解。
2. 于培養(yǎng)有100μl細胞/孔的96孔培養(yǎng)板中加入10μl MTS試劑。
3. 將96孔培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,37℃孵育1~4小時。
*如孵育后需立即檢測,請?zhí)敛襟E4;如稍后檢測,每孔加入25μl的20% SDS溶液,避光保存,18小時內(nèi)檢測。
4. 用酶標儀于490nm處測定OD值。
結(jié)果分析 將各測試孔的OD值減去對照孔或調(diào)零孔OD值。各平行孔的OD值取平均數(shù)。
注意事項:
1. 試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板,使MTS試劑與培養(yǎng)基充分混勻。
2. 試劑加入后培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔細胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細胞,加入MTS的培養(yǎng)時間一般為1~4小時,但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度(根據(jù)細胞種類而定)。與貼壁細胞相比,懸浮細胞較難顯色。對于懸浮細胞,在加入MTS培養(yǎng)1~4小時后,可先從培養(yǎng)箱中取出,目測染色程度或用酶標儀測定決定。白細胞較難顯色,因此需要較長的MTS反應時間或增加細胞數(shù)量(105個細胞/孔)。若顯色困難,可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定。注意:MTS的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。
3. MTS試劑中的試劑會與還原劑反應生成甲臜,如果實驗中有還原劑,需要檢查背景的OD值,即在不含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物,然后加入MTS試劑在一定時間內(nèi)檢測,和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較(只加MTS試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應。
4. 如果樣品為高渾濁度的細胞懸液,建議設定630nm~700nm作為參比波長,扣除參比波長的OD值即可。
5. 如果要測定細胞的具體數(shù)量,需要先做一個標準曲線。
6. 若測得OD值過高,可酌減鋪板細胞數(shù)或MTS試劑用量。
試劑包裝:
100次:1ml×1瓶;500次:5ml×l瓶;3,000次:5ml×6瓶;5,000次:5ml×10瓶;10,000次:100ml×l瓶。
貯藏條件:
MTS在避光0~5℃的條件下存放一年,測定效果完全不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復凍融會增加背景值,經(jīng)常使用時請于0~5℃條件下保存。
本試劑僅供科研使用。